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刺激试验-中国科学院固体危险废物鉴定中心放大图片

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上架日期:2015年5月25日
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品牌:中国科学院产地:广东省
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简要说明:中国科学院牌的刺激试验-中国科学院固体危险废物鉴定中心产品:估价:300,规格:bhy123,产品系列编号:032

详细介绍:

  

 刺激试验

中国科学院广州化学研究所分析测试中心

卿工----18933946343

6      一、皮肤刺激试验
     皮肤刺激试验是指皮肤接触药物是否产生可逆性炎性症状的试验,它又分急性皮肤刺激试验(一次皮肤涂抹实验)和多次皮肤刺激试验。
     所有皮肤刺激试验方法都在Draixe, Waodard和Calvery(1944)所提方法的基础上发展起来的。目前多选用家兔和豚鼠,对于强刺激或无刺激作用的药物用家兔检测效果好,但对作用缓和的刺激药物用豚鼠实验结果较准确。Criffth(1977)发现家兔通常比豚鼠和人更易敏感,用这两种动物评价人体反应更为合理。
     1. 实验材料
     ⑴ 动物:首选成年健康家兔,其次为豚鼠。家兔休重2kg,豚鼠300g左右,与给受试物24小时将动物背部脊柱两侧毛脱掉,脱毛面积约为体表面积10%(家兔每侧各约50cm2,豚鼠每侧约20cm2。
     ⑵ 受试物:膏剂、液体或粉末。粉末需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士林等)混匀,以保证受试物与皮肤有良好的接触。
     2. 实验方法
     至少选用3只家兔或5只豚鼠。在受试物区、对照区和破损皮肤区(脱毛后),一次或多次将受试物l ml或1.0g涂于受试物区,赋形剂则涂于对照区,用适宜方法固定。24小时后用温水或无刺激性溶剂去除残留受试物及赋形剂。去除受试物后1小时、24小时、48小时和72小时观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况,以及上述变化的恢复情况和时间。
     多次给受试物实验则一般每日涂抹一次,连续一周,其余均与一次给受试物的方法和要求一致。
     3. 结果判断与评价
     每只动物实验结果按表16-1进行刺激反应评分,计算出平均分值按表16-2进行刺激强度评价:
     
     
      二、 眼刺激试验
     眼对整个机体米说,相对较小。但是,对一个人的生活、工作和学习是至关重要的。而且眼是结构复杂而精细的感觉器官,能感受光线的强弱与波长的微小差别,从而判断物体的形状大小,距离与颜色。当眼受到外来化学物质(包括药物)作用时,其反应类型和方式也是复杂的。
     由药物直接接触角膜所引起的刺激作用,表现为炎症。如果短时间接触刺激性较强的药物,引起角膜结膜炎、角膜表层水肿、上皮脱落;结膜充血、水肿、发生灼痛、流泪、畏光等。如果长时间接触刺激性较弱的药物,可引起慢性结膜炎或睑腺炎,表现出充血、分泌物增多等。
     目前许多家庭常用的清洁剂和工业用品(一般情况电离型损伤较非电离型大,阳离子较阴离子损伤大),一旦进入眼睛,就可对角膜、结膜发生刺激,引起充血、水肿、流泪等反应。
     通过全身给药能影响角膜,如氯奎、氯普马嗓等。Potts等曾观察到这些药物对角膜有损伤,其作用可能是通过泪管或通过血一房水平屏障,这些作用对人来说仅在较大剂量清况下才发生。
眼刺激试验广泛用于评价药物的眼刺激作用。特别是眼科用药,必须进行动物的眼刺激试验,以保证临床用药的安全性。
     国外已有许多报道,用动物进行毒性评价存在许多差异。例如用兔和猴作实验,对眼刺激物的反应作过比较,发现对猴眼有中等刺激(主要是表层的改变和水肿以及轻微的表层改变)的药物,可引起兔眼的严重反应,包括不同程度的角膜混浊,血管翁形成以及结膜炎,研究者认为,这可能是由于兔和猴眼的解剖学结构的差异造成的。另外还指出,瞬膜可以使受检药物与眼紧密接触,使受损角膜恢复需较长时间;兔眼与人眼对各种药物刺激后流泪的量不一样,兔眨眼次数较人少(20 次/5分钟);兔泪水与人和其它动物泪水pH值不一样(兔,8.2,人,7.1-7.3,猴7.4)。
     另一方面,兔角膜损伤后,角膜翁形成迅速(比人快),通常在4-7天后,如果角膜损伤较大时,在14天内翁将包裹整个角膜。一般情况下,虽可消退一点,但不会完全消失,而终生残留下来。当人眼有翁反应时,一般都伴有慢性疾病,而不是急性刺激作用,在治疗后,翁可能消退,因兔眼腺有丰富的血管丛,它对损伤的反应快而强烈,又因角膜基质松弛。因此,易有新生血管和血管翁形成,这种反应在人和猴没有这样迅速。这些都说明家兔是较敏感的动物。
     但是不同种属眼的各个部位反应是不同的。如兔眼虹膜和结膜反应强。狗眼角膜反应强,猴的反应较其它种属轻,但角膜损伤较人重。有人用5%的肥皂水滴眼来比较兔与猴和人的角膜损伤情况,在裂隙灯的观察下发现:兔眼角膜上皮无作用,而猴和人的角膜上皮受损伤,这说明用灵长类来估价人的眼受损情况,比兔更能准确地预测人的反应,但是猴价值昂贵,且难于获得,不易管理和观察;猴的虹膜有色素,对虹膜血管充血改变不便观察。因此,目前仍首选白兔来作眼刺激试验,故无论选用任何一种动物来作试验,对结果的解释和外推至人时,应细致、谨慎。
     下面就眼刺激试验的程序作概要的叙述。
     1. 实验动物的选择
     在动物实验中,最理想的动物是其眼的结构以及反应的敏感性与人相接近。通常首选白色家兔来检测那些可能与眼睛接触的眼科用药对眼的刺激性。同时也使用狗和灵长类(如恒河猴,Rhesus, monkeys)。如果是研究药物对晶体、视网膜和眼神经的作用,则可选用大鼠、猫等。
     选用白色家兔作眼刺激试验,有明显的优越性,家兔来源广,较驯服,便于操作,价格相对便宜,并且易饲养。另一方面,白兔的眼球大,角膜表面积和球结膜范围都大,易于观察;虹膜无色素,便于对虹膜.血管的改变进行观测和摄像。但是,兔眼试验也有其缺点,这主要在于其结构与人眼有差别,兔眼瞬膜大,面人则已消退;另外,兔于的年龄、种系、性别及其健康状况还能影响眼刺激反应。
     实验时选用成年健康家兔至少4只,体重2-3kg,眼刺激试验又分为一次眼刺激试验和多次眼刺激试验。
     2. 眼刺激试验程序
     (1)一次眼刺激试验。将液态或软膏(不必稀释0.1ml或0.1g受试物滴人或涂人)实验动物一侧结膜囊内,另一侧眼作为对照。滴药后使眼被动闭合5-10秒,记录滴药后6小时、24小时、48小时和72小时对眼的局部反应,第4、7天观察恢复情况,观察时应用荧光素钠检查角膜损害,最好用裂隙灯检查角膜透明度、虹膜纹理改变。
     如果受试物明显引起眼刺激反应,可再选用6只动物,将受试物滴人一侧结膜囊内,接触4秒或30秒后用生理盐水冲洗干净,再观察眼的刺激反应。
     (2)多次性眼刺激试验。凡临床用药时间长的受试物要进行多次性的眼刺激试验,一般给受试物1周以上。实验结束后,继续观察7一14天。
     3. 结果判断与评价
     按表16-3要求,将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值相加,即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反应积分的总和除以动物数,就是该受试物对眼刺激性的最后分值。按表16-4标准,判定受试物眼刺激程度。
     表16-3 眼刺激反应评分
     
     表16-4 眼刺激性评价标准
      
      三、滴鼻剂和吸入剂刺激试验
     1. 实验目的
     观察受试物一次或多次滴人或吸人给予后所产生的刺激反应情况。
     2. 实验材料
     (1)动物:同急性毒性实验要求
     (2)受试物:液体或粉末剂
     3. 实验方法
     ⑴ 实验分组:实验时将动物分成给药组、赋形剂及空白对照组。用3只家兔或5只豚鼠和大鼠。
     ⑵ 给受试物方法及观察:实验时将受试物滴人或喷雾于动物。使受试物与其粘膜接触至少4小时。然后于24小时处死动物,取出局部粘膜组织,观察有无充血、红肿等现象。若有变化则须进行病理组织学检查。
     多次给受试物实验则一般每日滴人或吸人一次,连续一周,于末次给受试物24小时后处死动物。其它均与一次给受试物的方法和要求一致。
     4. 结果判断
     实验结果与对照组比较进行判断。
     四、应用于直肠、阴道制剂刺激实验
     1. 实验目的
     观察受试物一次或多次给动物直肠或阴道后所产生的刺激情况。
     2. 实验材料
     (1)动物:同急性毒性实验要求。(2)受试物:栓剂、液体或膏剂。
     3. 实验方法
     (1)实验分组:将动物分成给药组、赋形剂及空白对照组。每组家兔4只,大鼠6只。
     ⑵ 给受试物方法及观察:实验时将受试物置人动物直肠及阴道内,与其粘膜接触至少4小时后于24小时处死动物。取出局部直肠或阴道组织。观察有无充血、红肿等现象,若有须进行病理、组织学检查。
     多次给受试物则一般每日一次,连续一周,于末次给受试物后24小时处死动物,观察内容和要求与一次给药一致。
     4. 结果判断
     试验结果与对照组比较进行判断。


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