| 详细介绍：
微生物鉴定
中国科学院广州化学研究所分析测试中心
事业部-----卿工---18933946343
1． 形态和染色：链球菌的直径为0.5～1.0μm，呈成双和链状排列的卵圆形革兰阳性球菌，菌体小于葡萄球菌，无鞭毛，没有芽胞，但有些菌株会形成荚膜。肺炎链球菌呈矛头状，宽端相对，尖端向外。
2． 根据链球菌在血平板上溶血现象的不同分为三种：⑴甲型（α-）溶血，即菌落周围出现较窄的草绿色溶血环；⑵乙型（β-）溶血，即菌落周围出现较宽的透明溶血环；⑶丙型（γ-）溶血，即菌落周围无溶血环。
3． 根据抗原结构（C多糖抗原）的不同可分为A﹑B﹑C﹑D﹑E﹑F﹑G﹑H﹑K﹑L﹑M﹑N﹑O﹑P﹑Q﹑R﹑S﹑T等18个群，对人类有致病者90%属于A群，偶见其他群链球菌致病。 4． 链球菌属的种间鉴定 ⑴．乙型溶血链球菌的鉴定：
a． 对杆菌肽（0.04U/片）（抑菌圈直径≥10mm）敏感：A群链球菌（主要为化脓性链球菌）。
b． 对杆菌肽不敏感，胆汁七叶苷实验阴性，但马尿酸钠水解实验﹑CAMP实验阳性：B群链球菌（主要为无乳链球菌）。
c． 对杆菌肽不敏感，胆汁七叶苷实验阴性，马尿酸钠水解实验阴性，CAMP实验阴性：主要为马链球菌﹑类马链球菌﹑兽疫链球菌；对三者的区别实验要加做海藻糖和山梨醇实验。
d． CAMP实验：将能产生β-溶血的金黄色葡萄球菌在血平板上划一横线接种，再将待鉴定菌于金黄色葡萄球菌3mm处垂直种一短线，若在有CO2条件下培养5～6小时，或无CO2条件下培养18～24小时，在两细菌连接处出现一个半月型的加强溶血区即为CAMP实验阳性。 ⑵．甲型溶血链球菌的鉴定：
a． 草绿色链球菌：对杆菌肽敏感，对奥普托欣（Optochin）不敏感，胆汁溶菌实验阴性，胆汁七叶苷实验阴性，在高盐中不生长。主要有变异链球菌，轻型链球菌，血链球菌，唾液链球菌等。
b． 肺炎链球菌：菌体呈矛头状，成双排列，钝端相对，尖端相背，较葡萄球菌，其他链球菌略大；在血平板上菌落细小﹑圆形﹑表面光滑﹑灰白色﹑半透明，开始时菌落呈扁平状，以后中心塌陷，呈脐窝状。与草绿色链球菌的主要区别是胆汁溶菌实验阳性，对奥普托欣（Optochin）敏感。奥普托欣（Optochin）含量为5μg/片，抑菌环>18mm为敏感，<15mm为不敏感，15～18mm应重复实验。 ⑶．肠球菌（D群链球菌）的鉴定：
溶血不定，主要是α-﹑γ-溶血；对杆菌肽不敏感，但其特异性实验是胆汁七叶苷实验阳性；若能在6.5%NaCl的心浸液肉汤中生长即为D群肠球菌，不能生长为D群非肠球菌。
⑷．链球菌属鉴定的系统生化结果判断 a． 1%美兰牛乳
b． 胆汁七叶苷实验：变黑为阳性。
c． PH9.6肉汤实验：变浑浊为能在碱性环境中生长（阳性）。 d． 6.5%NaCl心浸液肉汤：由紫变黄为能在高盐环境中生长（阳性）。 e． 精氨酸双水解酶实验：变红色（对照不变色，仍为黄色）为阳性。 五．奈瑟氏菌属和布兰汉菌属
奈瑟氏菌属主要有脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布兰汉氏菌属只有卡他布兰汉氏菌。两者系需氧革兰阴性球菌。
⑴ 奈瑟氏菌的生物学特性：革兰阴性球菌，需氧，卵圆形或肾形，无动力，氧化酶及触酶均阳性。培养时对营养要求高，能在巧克力平板或有丰富营养的血平板上，在5～10%CO2环境中生长。 ⑵．鉴定过程：
a． DNA酶实验阳性为布兰汉氏菌，阴性则为奈瑟氏菌。
b． 能在普通血平板上生长的为其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生长的主要为脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。
c． 能使麦芽糖氧化分解产酸的是脑膜炎奈瑟氏菌，不利用麦芽糖的是淋病奈瑟氏菌。
⑶．几种主要细菌对葡萄糖﹑麦芽糖﹑蔗糖的氧化分解产酸结果如下： 氧化分解产酸
菌种葡萄糖麦芽糖蔗糖 淋病奈瑟氏菌＋－－ 脑膜炎奈瑟氏菌＋＋－ 粘液奈瑟氏菌＋＋＋ 卡他布兰汉菌－－－ ⑷ DNA酶实验：
a． 方法：将待鉴定细菌点种于含0.2%DNA的DNA琼脂平板上，培养后用1mmol/LHCl覆盖平板，菌落周围出现透明环者为阳性。
b． 原理：某些细菌能产生DNA酶，可使DNA长链水解成由几个单核苷酸组成的寡核苷酸链；长链DNA可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸链则可溶于酸，故在DNA琼脂平板加盐酸，可在菌落周围形成透明的溶血环。（肠杆菌科中只有沙雷氏菌和变形杆菌可产生DNA酶，阳性球菌中只有金葡菌能产生DNA酶。） 六．肠杆菌科
肠杆菌科是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，其中对人致病性较强的鼠疫耶尔森菌（现已基本没有流行）和伤寒沙门菌；4类常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希氏菌﹑志贺氏菌﹑沙门氏菌﹑耶尔森氏菌）和8种常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属﹑克雷伯菌属﹑肠杆菌属﹑多源菌属﹑沙雷菌属﹑变形杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属）。另外还有很多细菌是肠道的正常菌群，但在一定条件下也可致病（条件致病菌）。
实验过程中对于革兰阴性杆菌首先要做氧化酶实验，阴性为肠杆菌科细菌；阳性的为非发酵菌（我们实验室还没有简单的系统鉴定方法，一般要仪器上卡检测）或弧菌科细菌。 1． 肠杆菌科的系统生化 ⑴．KIA试验（克氏双糖铁）
组成：乳糖／葡萄糖=10／1（斜面／高层，其长度最好是都是2CM） 结果判断：斜面或高层变黄色：阳性；不变色（红色）：阴性 高层中出现裂隙：产气阳性
高层中出现黑色（FeS）：产H2S阳性 ⑵．苯丙氨酸脱羧酶试验
细菌产生的苯丙氨酸脱羧酶使苯丙氨酸氧化脱羧后生成苯丙酮酸，再与10%的FeCl3试剂产成深绿色反应。（变形杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属为阳性，其他为阴性）
⑶．枸橼酸盐试验（碳源利用实验）
在枸橼酸盐培养基中细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐，分解后生成碳酸钠，使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深兰色，即为枸橼酸盐试验阳性。（埃希氏菌属，志贺氏菌属，爱德华菌属为阴性，其他为阳性） 注意：接种时不能被糖，蛋白胨污染，要单独接种） ⑷．甲基红（MR）试验
细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培养基的pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂由桔黄色变桔红色为弱阳性；变红色为阳性。 培养基成分：葡萄糖蛋白胨水
试剂：甲基红0.1g，酒精300ml，水200ml
主要用于大肠埃希菌（＋）和产气肠杆菌（－）的鉴别；常与V-P实验联合使用，一般情况下两者结果正好相反，但也有例外如奇变两者同为阳性。 ⑸．MIU（动力－靛基质－尿素）试验
①．动力：在半固体培养基中穿刺接种细菌培养后，若穿刺线周围有细菌扩散生长，则为动力（＋）；清晰则为动力（－）。
②．靛基质试验（吲哚试验）：某些细菌有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再与试剂对位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈红色。 ③．尿素试验：某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱，再使培养基中的指示剂（0.4%酚红）变红色即为阳性。 ⑹．硝酸盐还原试验 NO3ˉ→→NO2ˉ（大肠） NO3ˉ→→NH4＋
NO3ˉ→→N2（沙雷氏菌属） 试剂甲：对氨基苯磺酸
试剂乙：α-萘胺
观察结果时甲液和乙液要等量加入，立即或10min内出现红色为阳性。若不变色，则要加入锌粉：①变红色，说明硝还试验为真阴性②仍不变色，说明硝还试验真阳性，但原先还原产物不是NO2ˉ。
阴性结果出现时有三种可能：①细菌不能还原硝酸盐②亚硝酸盐继续分解生成氨或氮③培养基不适合细菌生长
肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 ⑺．氨基酸脱羧试验
细菌产生脱羧酶分解氨基酸使其脱羧生成胺和CO2，虽然各种细菌所产生的脱羧酶不一定相同，但最后都能生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和CO2。然后胺能使培养基变碱性，通过指示剂（溴甲酚紫）由黄变紫即为阳性。对照管（无氨基酸）为黄色。
注意：①微量管接种好后要加石蜡，使培养基造成厌氧环境。（生成的胺更稳定，还能诱导氨基酸脱羧酶的产生）
②对照管如果不显黄色，则结果不能判断。
应用：除伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌外，其他沙门氏菌鸟AA，赖AA均为阳性；除宋氏和鲍氏志贺菌外其他志贺菌也菌为阳性。 ⑻．葡萄糖酸盐试验
微量管在培养18～24h后，加班氏试剂，水浴煮沸10min，由兰色变黄绿色到砖红色即为阳性，不变为阴性
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