采用酸性染料分光光度法检测总碱含量，在pH4.5 缓冲液中，石斛碱盐的离子与溴

甲酚绿阴离子结合成离子对并定量被氯仿提取，再加碱碱化，根据定量释放的溴甲酚绿

再一定波长处测定吸收度。

2.材料和设备:

紫外可分光光度计；pH 值4.5 缓冲溶液为0.2mol／L 的邻苯二甲酸氢钾(pH 值=4)，

用0.2mol／L 的NaOH 调至pH 值为4.5；O.04％的溴甲酚绿溶液为溴甲酚绿40.0mg 以pH

值4．5 的缓冲溶液溶解并定容至lOOmL 过滤所得；O.01 mol／L NaOH 无水乙醇溶液、氯

仿、去离子水，石斛碱标准品。

3.石斛总碱检测方法：

3.1 石斛总碱标准曲线制备:

精密称取石解碱标准品1mg,置干100ml 容量瓶中，加氯仿至100ml 刻度，溶解摇匀。吸取石斛碱标准溶液1.O、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 分别置于分液漏斗中，加氯仿至10.0mL，再加入pH 值4.5 的缓冲溶液5.0mL 和0.04％的溴甲酚绿溶液1.0mL 后剧烈振摇3min，静置30min，取下层，用氯仿浸泡处理并用干燥的脱脂棉过滤，取续滤液6．0mL，加0.01mol／L 的NaOH 无水乙醇溶液1.0mL，匀。依同法以氯仿制备空白对照。于波长620nm 处测定吸收度，绘制标准曲线。

曲线方程为：y=135.89X-0.0091(R2=0.9954)

Y 为检测时的10ml 中石斛总碱的质量（ug）；X 为吸光度

3.2 样品中总碱检测：

称取石斛粉末100mg，用适量氨水润湿后加塞密闭放置30min，加入氯仿100.0mL 后

称重。80℃水浴上热回流2h，冷却后补足氯仿至原重，过滤定容至100mL。吸取续滤液

2.0mL 于100mL 容量瓶中，以氯仿定容至刻度，吸取10mL，按标准曲线制备步骤操作，

测定吸收度。