HFLS-RA：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞
【细胞货号】 C0495
【细胞缩写】 HFLS-RA细胞
【细胞名称】 HFLS-RA(类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞)
【背景资料】 见细胞说明书
【细胞消化时注意把握消化时间，消化不够会导致吹打细胞时造成损伤，一般消化时间是2-3分钟，但以镜检时大部分细胞缩回球形为准，一般2次即可将细胞吹打下来，消化不够进行细胞吹打易损伤细胞。细胞系的冻存液配方：90%FBS+10%DMSO，贴壁细胞若出现分布不均，HFLS-RA：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养】 "细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系；Primary Cells: HFLS-RA (408RA-05a)
Catalogue No.: 06090701 CAI No.: 408RA-05a
Cell Line Name: HFLS-RA (408RA-05a)
Keyword Descrtption: Human Fibroblast-Like Synoviocyte Rheumatoid Arthritis (HFLS-RA); adult
Species: Human
Tissue: Synoviocyte
Cell Line Descrtption: Human Fibroblast-Like Synoviocytes (HFLS) are isolated from synovial tissues obtained from patients with Rheumatoid Arthritis (RA) / Osteoarthritis (OA). They are cryopreserved at second passage and can be cultured and propagated at least 5 population doublings. HFLS are long known for their role in joint destruction by producing cytokines and metalloproteinases that contribute to cartilage degradation(1,2). Proinflammatory cytokines induce the proliferation, collagenase and aggrecanase production and GM-CSF secretion on HFLS(3, 4). Ongoing arthritis research also has shown that HFLS express apoptosis and P53 mutations(5, 6). We provide two types of HFLS that are useful cellular models for studying the differences between HFLS-RA and HFLS-OA, such as the expression and regulation of proteases(7) and integrin subunits(8)."
【代次】 P4
【规格】 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
【细胞数】 1*10（6）
【生物安全级别】 1
【生物体】 人
【组织来源】 滑膜细胞
【细胞形态】 详见细胞说明书部分
【细胞特性】 贴壁
【特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养，贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养，如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，HFLS-RA：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
【培养条件】 详见细胞说明书
【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】 详见细胞说明书
【主要文献】 请具体查阅相关发表文章
细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，HFLS-RA：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。
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